Podparcia szklane ZX-27 w kontakcie z wyrostkiem zębodołowym

Badania immunohistochemiczne

Kostki parafinowe z zatopionym materiałem tkankowym skrawano na mikrotomie, uzyskując skrawki grubości do 6 mikronów. Otrzymane skrawki odparafinowano przez około godzinę w cieplarce w temperaturze 68°C, a następnie pozbywano się resztek parafiny w ksylenie. Skrawki przeprowadzono przez szereg alkoholi (od 100% do 96%), a następnie przez 10 minut blokowano aktywność endogennej peroksydazy w 3-proc. roztworze nadtlenku wodoru (H2O2). Po usunięciu endogennej peroksydazy płukano preparaty w wodzie bieżącej przez 10 minut. W celu odkrycia antygenów preparaty poddano procesowi gotowania w buforze cytrynianowym o pH 6,0 (Dako nr kat. S1699) w kuchence mikrofalowej do momentu zagotowania na najwyższym watażu, a potem 20 minut na najniższym watażu. Preparaty studzono przez 20 minut w buforze cytrynianowym, a potem przez 10 minut w wodzie destylowanej. Preparaty przekładano na 10 minut do buforu płuczącego TBS o pH 7,6 (Dako nr kat. S1968). Inkubowano z pierwszym przeciwciałem Ki-67 (Dako nr kat. N1633) w temp. pokojowej przez 30 minut. Ponownie płukano preparaty w buforze płuczącym TBS przez 10 minut. Następnie inkubowano je z drugim przeciwciałem – BIOTINYLATED LINK z kitu LSAB2 (Dako nr kat. K0675) przez 30 minut. Preparaty przekładano na 10 minut do buforu płuczącego TBS. Kolejnym etapem była inkubacja z kompleksem Streptavidin- HRP z kitu LSAB2 System- HRP. Ponownie płukano w buforze TBS przez 10 minut. Preparaty przez 10 minut barwiono chromogenem DAB (Dako nr kat. K3468), a jądra komórkowe dodatkowo podbarwiano przez 2 minuty hematoksyliną Mayera. Końcowym etapem było przeprowadzenie preparatów w odwrotnym szeregu alkoholi (od 96% do 100%) oraz w ksylenie. Preparaty nakrywano w sposób typowy.

Wszystkie otrzymane preparaty oglądano w mikroskopie świetlnym Olympus BX50, z przystawkami do mikrofotog...